WWW.KNIGA.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Онлайн материалы
 

«ПАРАЗИТОЛОГИЯ, VI, 4, 1972 УДК 595.775; 576.851.45 О ХАРАКТЕРЕ ДЕЙСТВИЯ И ПРИРОДЕ БАКТЕРИЦИДНОГО ФАКТОРА К И Ш Е Ч Н И К А БЛОХ А. Н. Алексеев, В. А. ...»

ПАРАЗИТОЛОГИЯ, VI, 4, 1972

УДК 595.775; 576.851.45

О ХАРАКТЕРЕ ДЕЙСТВИЯ И ПРИРОДЕ

БАКТЕРИЦИДНОГО ФАКТОРА К И Ш Е Ч Н И К А БЛОХ

А. Н. Алексеев, В. А. Бибикова, Н. М. Хрусцелевская

и Ж. К. Кантарбаева

Всесоюзный научно-исследовательский институт дезинфекции

и стерилизации Министерства здавоохранения СССР, Москва,

и Среднеазиатский научно-исследовательский противочумный институт, Алма-Ата Путем индивидуального дозированного заражения блох Xenopsylla gerbilli minax микробами чумы (живыми или убитыми нагреванием) с последующим исследованием насекомых либо на наличие жизнеспособных возбудителей, либо на присутствие зон лизиса на газоне с М. lysodeikticus установлено, что желудок блох содержит лизоцим. Бактерицидный эффект, однако, связан не только с наличием лизоцима, но и других — пока неизвестных компонентов, способных быстро обезвреживать грамотрицательные P. pestis. Действие бактерицидного фактора облегчается в гипотонической среде с меньшим относительным содержанием крови. P. pestis, выращенные при 37°, более чувствительны к действию бактерицидного фактора, нежели культивировавшиеся при 28°.

В наших предыдущих сообщениях (Алексеев, Бибиков, Хрусцелевская, 1968, 1969 а, б) было показано, что в кишечнике разных видов блох происходит частичное или полное обезвреживание микробов чумы Pasteurella pestis. Уменьшение количества жизнеспособных микробов происходило в течение первых же минут после попадания в блоху и могло быть заторможено путем понижения температуры (Алексеев и др.



, 1968, 1969а), либо путем предварительного кормления блох взвесью убитых нагреванием микробов (Алексеев и др., 1969 а, б). О выделении от блох лизирующего вещества сообщила и Соколова (1959). В последующем, заражая блох на мыши или через мембрану, Кондрашкина, Кураев и Захарова (1968), показали, что в зараженных блохах как освободившихся, так и, что реже, не освободившихся от микробов чумы в ряде случаев может накапливаться вещество, способное лизировать микробов вакцинного штамма чумы ЕВ на газоне. Там же было высказано предположение, что быстрое обезвреживание возбудителя чумы в наших опытах (Алексеев и др., 1968, 1969а) могло быть связано с гипотоничностью использованной заражающей взвеси. Действительно, для заражения блох мы использовали смесь из равных частей микробов в физиологическом растворе и гемолизированной крови, к 1 мл которой добавляли 9 мл дистиллированной воды. Кровь не приводили к изотоническому состоянию и в отличие от опытов Кондрашкиной с соавторами (1968), где использовали взвесь в соотношении объемов нативной крови и микробной взвеси 1 : 0.5, это соотношение составляло 0.05 : 1. Однако не только уточнение методики проверки действия бактерицидного фактора побудило нас предпринять настоящее исследование.

В последние годы ряд немецких авторов (Malke, 1965; Messner, 1966;

Mohrig u. Messner, 1968a, b) усиленно отстаивают мнение о том, что единственным бактерицидным фактором, действующим в организме насекомых,, является лизоцим — широко распространенный в животном мире, неспецифический защитный (антибактериальный) фактор. Лизоцим выделен впервые Флеммингом (Flemming, 1922, 1932). Структура и действие его подробно описаны Йеллесом (Joelles, 1964). Лизоцим (мураминидаза) нарушает целостность клеточной стенки главным образом грамположительных бактерий, разрывая в мукополисахаридах оболочек [3 1.4-глюкозидную связь N-ацетилмурановой кислоты и N-ацетилглюкозамина. Известно, что лизоцим in vitro не оказывает влияния на микроб чумы (Добрая, 1937; Кишиневский, 1969).





Действие его на грамотрицательные бактерии становится возможным, но всей вероятности, в присутствии каких-либо дополнительных факторов, возможно сходных по эффекту с этилендиаминтетрауксусной кислотой, как в опытах Игон и Карсон (Eagon and Carson, 1965). В связи с изложенным главная цель настоящего исследования состояла в выявлении наличия лизоцима в кишечнике блох и его возможной роли в обезвреживании микробов чумы.

В опытах были использованы самки Xenopsylla gerbilli minax на III — IV стадиях переваривания крови, голодавшие до заражения 3—4 суток при 22—24°, и вирулентный штамм чумного микроба 161. Инфицирование блох, как и в более ранних наших работах, производили на аппарате для индивидуального дозированного кормления насекомых по известной методике (Алексеев, 1965; Алексеев, Бибикова и Хрусцелевская, 1967).

Для заражения готовили микробную суспензию с кровью как по старой нашей прописи 1 мл взвеси, содержащей 2 млрд микробных тел вирулентного 161-го штамма чумного микроба с 1 мл гемолизированной крови (соотношение крови и воды для гемолиза 1 : 9 ), так и по прописи, близкой по составу к используемой Кондрашкиной с соавторами. 1 Количество нативной крови было вдвое большим, нежели микробной взвеси, а сама смесь была приведена к изотоническому состоянию. Д л я этого к 1 мл крови морской свинки добавляли для гемолиза 4 мл дистиллированной воды,, а затем для восстановления изотоничности к 5 мл такой крови добавляли 45 мг стерильной поваренной соли. К полученной смеси добавляли 0.5 мл микробной взвеси в физиологическом растворе, содержащей 5.5 млрд м. т.

в этом объеме. Таким образом, количество микробных тел в 1 мл было равно 1 млрд. Кроме того, в качестве дополнительного контроля использовали кровь, гемолиз которой достигался добавлением 9 мл воды к 1 мл крови, но в последующем к 5 мл этой жидкости для получения изотонического раствора добавляли 45 мг соли. Смешиванием 1 мл этой крови с 1 мл двухмиллиардной взвеси микробов получали заражающую смесь, в 1 мл которой находился 1 млрд м. т.

В опытах использовали клетки возбудителя чумы, выращенные как прн 37 р, так и при 28 р. В первом случае блохам таким образом вводили микробы с полным набором детерминант вирулентности для теплокровных, во втором — с неполным. К использованию микробов, инкубированных в разных условиях температуры (28 и 37°), нас побуждала известная разница в их приживаемости в блохах в связи с фенотипическим состоянием бактерий (Бибикова и Классовский, 1968). До и после заражающего кормления блох с целью уточнения количества жизнеспособных м. т. путем титрования методом последовательных разведений брали капилляром пробы из пипетки со взвесью микробов. Зараженных блох растирали в 1 мл бульона Хоттингера, а затем также титровали методом последовательных разведений, высевая на чашки с агаром (с добавлением генцианвиолета) по 0.1 мл жидкости; 0.1 мл исходной взвеси сеяли в бульон.

Кроме того, на агаре делали отпечатки пестика, которым растирали блоху.

«Рецепт» этой прописи был составлен по рекомендации и при любезном участии Е. Е. Пунского, за что авторы выражают свою признательность.

Из данных табл. 1 видно, что выраженной статистически достоверной разницы в заражаемости блох в зависимости от тоничности микробной взвеси нет ни в одном случае (td ^ 2). Следовательно, освобождение от микробов, как по данным! наших предыдущих наблюдений, так и по данным настоящего исследования, не может быть связано с отмиранием микробов только из-за гипотоничности кормовой жидкости, а зависит главным образом от отмирания в результате последующего воздействия среды кишечника и действия его бактерицидного фактора. Сравнение данных о числе инфицированных блох, получавших во взвеси разное количество нативной крови, также показало, что заражаемость блох не зависит существенным образом от этого фактора (td ^ 2. 5 ).

–  –  –

Как видно из табл. 1, в которой показано относительное количество случаев обнаружения микробов чумы в искусственно зараженных блохах, число зараженных особей, исследованных через 3 час. после инфицирующего кормления, неизменно снижается независимо от качества заражающей жидкости. И даже при немедленном исследовании после заражения далеко не во всех особях удается выявить жизнеспособных P. pestis.

Выживаемость микробов в блохах в зависимости от температуры, при которой выращивали возбудителя, несколько отличается друг от друга и коррелирует с составом кормовой жидкости. Так, если блохам давали микробную взвесь в крови гемолизированной большим количеством воды (1 : 9), лучше выживали те клетки, которые культивировались при 28^ (с достоверностью 90 и 95%). Если же отвлечься от статистически достоверно различающихся цифр, то обзор таблицы показывает, что выживаемость микробов в желудке блох почти по всем показателям (заражаемости при исследовании через 0 и 3 час. и в большинстве случаев по числу особей с количеством обнаруженных жизнеспособных микробных тел, превышающим 100) оказывается выше именно тогда, когда для заражения были использованы микробы, выращенные при 28Q. Можно предпо

–  –  –

10.000 2656* 15.000 1.094 307 87 125 11.500 913 0.05 : 1 1:9 + 2.000 738 50 12.500 2.600 1.500 6.000 7.500 122 + 750 ** 106 75.000 567 33 1 : 05 1:4 — —

–  –  –

3 Паразитология, вып. 4, 1972 г. 341 показать, что изотонизация раствора, действительно, в большинстве случаев уменьшает уровень падения числа жизнеспособных микробов в блохах. Как видно из табл. 2, это явление более выражено в тех опытах, где использованы микробы, выращенные при 37 Q. Возможно, что они, попав в желудок блохи, более чуствительны к нарушению изотонического состояния среды. Сравнение уровней падения числа жизнеспособных микробных тел позволяет выявить преимущества той или иной кормовой смеси. Изготовление кормовой жидкости с более высоким относительным содержанием крови как по отношению к объему входящей в смесь суспензии микробов (1 : 0.5), так и по отношению к объему дистиллированной воды (1 : 4) заметно уменьшает отмирание жизнеспособных микробных клеток, причем это преимущество в их выживаемости сказывается на микробах, выращенных и при 28° и при 37Q. Естественно предположить, что в нативной крови действие бактерицидного фактора несколько затруднено.

–  –  –

500 43 100 75* 3 -10 2 —1.5 -10 3 { 1+ 7.5 300 23 4 750 54 1094 2656* 6 -10 3 —8 -10 4 1+ { П р и м е ч а н и е. В этих опытах для изготовления кормовой заражающей смеси использованы микробы, выращенные при 37°.

Уровень снижения числа жизнеспособных микробных тел тем значительнее, чем выше (очевидно, в определенных пределах) исходная заражающая доза. Как видно из табл. 3, при введении тысяч микробных тел уровень снижается в блохах в сотни и тысячи раз, при введении сотен микробов — лишь в десятки, редко — сотни раз.

Как при малых, так и особенно при больших заражающих дозах изотоничность раствора способствует лучшему выживанию микробов. В гипотонической среде выращенные при 37Q микробы отмирают более интенсивно. Эти данные говорят о том, что в организме блохи бактерицидный фактор лучше обнаруживает свои литические свойства именно в гипотонической среде. Исходя из данных Малке (Malke, 1965) и Мориг и Меснер (Mohrig u. Messner, 1968b) о наличии лизоцима в кишечнике ряда членистоногих, мы повторили их опыты с кишечником блох и газоном из микробов Micrococcus lysodeikticus, используемых в качестве тест-объекта для обнаружения лизоцима.

Д л я проверки наличия и действия лизоцима кишечник блохи IV— V стадии переваривания крови помещали на газон М. lysodeikticus, заготовленный за 2—2.5 час. до посева насекомых. Такие блохи служили контролем. Кроме них, использовали и пищеварительный тракт блох, которым предварительно были введены разные количества убитых нагреванием взвесей М. lysodeikticus и P. pestis. В опытах было более 300 индивидуально накормленных блох. 2 Первые же наблюдения подтвердили существование лизоцима в кишечнике блох. Как видно на рис. 2 (2), зона лизиса на газоне М. lysoТолько два наблюдения, среднее не может быть выведено без существенной ошибки.

По Дункан (Duncan, 1926) именно наличие крови в желудке кровососов способствует активизации бактерицидного фактора.

deikticus занимает участок диаметром около 3 мм. Зона лизиса вокруг желудка блохи, получившей в виде взвеси 60 тыс. м. т., примерно вдвое меньше (рис. 2, 2), а получивший 120 тыс. м. т. еще вдвое меньше и едва заметна. Мы таким образом, казалось бы, получили прямое подтверждение нашим предыдущим опытам, в которых добились увеличения заражаемости блох путем предварительного введения взвеси убитых нагреванием микробов.

Однако дело, видимо, обстоит сложнее, чем мы полагали; введение блохам грамотрицательных бактерий (P. pestis, убитых нагреванием) в количестве 80—100 тыс. (при условии посева желудков в первые часы после кормления блох) практически не дало уменьшения зоны лизиса по сравнению с контролем. Только через сутки пребывания в кишечнике

–  –  –

размеры зон лизиса вокруг выпрепарованных через этот срок желудков составили соответственно 2, 0.1, 6 и 0 мм для доз, равных 40, 80, 160 тыс. м. т. (в контроле — зоны лизиса, 3—3.5 мм в диаметре).

Как же согласовать данные об обезвреживании вирулентных клеток возбудителя чумы в первые минуты после заражения с таким замедленным адсорбированием лизоцима, тем более что известно, что лизоцим in vitro не действует на грамотрицательные микробы чумы (Flemming, 1922)?

Очевидно, в желудке блох присутствует еще, по крайней мере, один фактор, который способствует действию лизоцима и на грам-отрицательные микробы чумы. В отличие от лизоцима, судя по быстроте эффекта, этот фактор в первые минуты (и часы) после контроля с микробами оказывает бактериостатическое действие. По всей вероятности, на первом этапе взаимодействия активны некие ко-факторы (и среди них — бактериостатик), которые в дальнейшем облегчают эффект лизоцима, делают для него возможным адсорбцию на поверхности грам-отрицательных бактерий и литическое воздействие (что мы и наблюдаем через сутки).

Каким образом действуют эти факторы в кишечнике блох — пока остается неясным. Можно только с уверенностью утверждать, что действуют они чрезвычайно быстро — в течение минут — и весьма эффективно, так как кратность снижения числа жизнеспособных бактерий в кишечнике блох в некоторых опытах достигает десятков тысяч раз (табл. 2, 3). А число особей, успевающих полностью обезвредить полученных микробов спустя 3 час. после заражения тысячами и десятками тысяч микробных тел, колеблется в пределах 20—100% (табл. 1). Массивное заражение блох микробами чумы в ряде случаев приводит к их своеобразной «иммунизации» и накоплению обоих факторов (лизоцима 3* 343.

и гипотетического ко-фактора), что делает возможным получение лизиса на газоне из вакцинного штамма возбудителя чумы, как это показала Кондрашкина с соавторами (1969). Явления, которые наблюдаются в этих и наших опытах, по своему механизму, по всей вероятности, сходны с теми, которые наблюдал Стефане (Stephens, 1959), отметивший нарастание защитной реакции у насекомых, в полость тела которых вводили другой вид грамотрицательных бактерий — Pseudomonas aruginosa.

Поскольку лизоцим найден и в кишечнике, и в гемоцеле насекомых (Мориг и Месснер, 1969), имеются основания полагать, что активный в отношении грам-отрицательных бактерий компонент может присутствовать и в кишечнике, и в гемолимфе насекомых. Во всяком случае, основываясь на нашем материале, уже теперь можно утверждать, что бактерицидное действие содержимого кишечника таких кровососов, как блохи, не исключая активности лизоцима, им не исчерпывается и является многокомпонентным.

ВЫВОДЫ

1. Показано, что в кишечнике блох присутствует лизоцим, однако бактерицидное действие содержимого кишечника блох на грамотрицательные микробы P. pestis не определяется только его активностью. Необходимо предположение о многокомпонентности бактерицидного фактора и допущение бактериостатического действия одного из компонентов.

2. Нарушение изотонического состояния среды за счет пониженного содержания солей облегчает действие бактерицидного фактора, что говорит в пользу его литически-активной природы.

3. Увеличение концентрации нативной крови в заражающей жидкости лишь незначительно уменьшает активность бактерицидного фактора.

4. Наличие полного набора детерминант вирулентности у микробов чумы, выращенных при 37Q, не только не затрудняет, но даже несколько облегчает действие бактерицидного фактора, что сказывается в ускоренном отмирании таких бактерий в кишечнике блох по сравнению с P. pestis, выращенными при температуре 28Q.

Литература А л е к с е е в А. Н. 1965. Принудительное дозированное кормление насекомых.

Мед. паразитол. и паразитарн. бол., 4 : 367—471.

А л е к с е е в А. Н., Б и б и к о в а В. А. и Х р у с ц е л е в с к а я Н. М. 1967.

Методика индивидуального принудительного дозированного заражения блох микробами чумы. Паразитол., 1 (2) : 176—179.

А л е к с е е в А. Н., Б и б и к о в а В. А. и Х р у с ц е л е в с к а я Н. М. 1968.

Наблюдения за питанием блох в условиях принудительного кормления через капилляр возбудителем чумы. Паразитол., 2 (2) : 115—123.

А л е к с е е в А. Н., Б и б и к о в а В. А. и Х р у с ц е л е в с к а я Н. М. 1969а.

Некоторые доказательства существования бактерицидного фактора в организме кровососов на примере блох — переносчиков чумы. Паразитол., 3 (3) : 228—235.

А л е к с е е в А. Н., Б и б и к о в а В. А. и Х р у с ц е л е в с к а я Н. М. 19696.

К вопросу о бактерицидном факторе желудочно-кишечного тракта блох.

Тр. ЦНИДИ, 2 0 : 3 6 7 — 3 7 1.

Б и б и к о в а В. А. и К л а с с о в с к и й JI. Н. 1968. О фенотипической изменчивости возбудителя чумы в связи со сменой хозяев. Паразитол., 2 (3) : 209— 214.

Добрая Т. Е. Лизоцим. ВМЭиП, 16 (9—4) : 492—502.

К и ш и н е в с к и й А. М. 1969. Литиевые сферопласты чумного микроба. Пробл.

особо опасн. инф., 2 : 74—78.

К о н д р а ш к и н а К. П., К у р а е в И. И. и З а х а р о в а Г. А. 1968. Некоторые вопросы взаимоадаптации чумного микроба с организмом блохи. Паразитол., 2 (6) : 543—547.

Кондрашкина К. И. 1969. Болеют ли блохи чумой? Пробл. особо опасн инф., 5 : 212—222.

Соколова Н. М. 1959. Выделение от эктопаразитов лизирующего вещества, симулирующего чумной бактериофаг. Тр. инст. «Микроб»; 3 : 93—97.

М о р и г В. и М е с с н е р Б. 1969. Значение лизоцима в антибактериальном иммунитете насекомых. Журн. Общ. Биол., 30 (1) : 62—71.

D u n c a n i. 1926. On bactericidal principle present in alimentary canal of Insects and Arachnids. Parasitol., 18 (1) : 238—252.

F l e m m i n g A. 1922. On a remarcable bacteriolytic element found in tissues and secretions. Proc. Roy. Soc., Ser. В., 93 : 306—317.

F l e m m i n g A. 1932. Lysozyme. Proc. Roy. Soc. of Med., 26 (2) : 71—84.

J o e l i e s P. 1964. Neuere Untersuchungen an Lysozymen. Angew. Chem., 76 : 20—28.

E a g о n R. G., a. C a r s o n K. J. 1965. Lysis of cell walls and intact cells of Pseudomonas aeruginosa by ethylendiamine tetraacetic acid and by lysozyme. Ganad J.

Mitrobiol., 11 : 193—201.

M a 1 к e H. 1965. Uber das Vorkommen von Lysozym in Insekten. Z. Allgem. Microbiol., 5 (1) : 42—47.

M e s s n e r B. 1966. Das Lysozumvorcommen in Beziehung zur unspezifischen Immunitat der Insekten. Zool. Anz., Suppl., 29 : 511—512.

M о h r i g W. und M e s s n e r B. 1967. Lysozum in humoralen Abwehrmechanismus spezifisch und unspecifisch immunisierter Insekten. Biol. Rdsch., 5 : 181—183.

M о h r i g W. und M e s s n e r B. 1968a. Immunreaktionen bei Insekten. I. Lysozym als grundlegender antibakterieller Faktor im humoralen Abwehrmechanismus der Insekten. Biol. Zbl. 87 (4) : 439—470.

M о h r i g W. und M e s s n e r B. 1968b. II. Lysozym als antimikrobielles Agens im Darmtrakt von Insekten. Biol. Zbl. 87 (6) : 705—718.

S t e p h e n s J. M. 1959. Immune responses of some insects to some bacterial antigens.

Can J. Microbiol., 5 : 203—228.

–  –  –

By individual dose infection of fleas Xenopsylla gerbilli minax, with microbes of plague (alive or killed by heating) and subsequent studies of insects for the presence of viable agents or lysis zones it was established on the layer with M. lysodeikticus that the stomach of fleas contains lysozyme. However, the bactericid effect is associated not only with the presence of lysozyme but with other now unknown components which, apparently, are efficient in destroying P. pestis. The effect of bactericid factor is facilitated in hypotonic medium with lesser relative blood content. Specimens of P. pestis

Похожие работы:

«Рисунки А. Сазонова, В. Сутеева, С. Бордюга и Н. Трепенок, А. Муратовой, Е. Вульф, Н. Воронцова С. Ма рша к ДВЕНАДЦАТЬ МЕСЯЦЕВ Ворон. Праздник нынче — Новый год. Недаром и мороз ударил новогодний, трескучий. Эх, расправить бы крылья, полетать, согреться — да стар...»

«ГОРНОЕ і ЗАВОДСКОЕ ШО. О КАЛОРИЧЕСКИХЪ, ГАЗОВЫХЪ И НЕФТЯНЫХЪ МАШИНАХЪ Г орн. Инж. М. М итте. Паровыя машины достигли въ настоящее время, безъ сомннія, высо­ кой степени совершенства. Н а послдней Парижской выставк, мы видимъ паровыя машины р аз­ личныхъ системъ, какъ: С огіізз’а, С о И т а т Г а, 8и1иег’а и проч., въ которыхъ вредныя простран...»

«ОРГАНИЗАЦИЯ A ОБЪЕДИНЕННЫХ НАЦИЙ ГЕНЕРАЛЬНАЯ АССАМБЛЕЯ Distr. GENERAL A/HRC/WG.6/2/PAK/3 3 April 2008 RUSSIAN Original: ENGLISH СОВЕТ ПО ПРАВАМ ЧЕЛОВЕКА Рабочая группа по универсальному периодическому обзору Вторая сессия Женева, 5-16 мая 2008 года РЕЗЮМЕ, ПОДГОТОВЛЕННОЕ УПРАВЛЕНИЕМ ВЕРХОВНОГО КОМИССАРА ПО ПРАВАМ ЧЕЛОВЕКА В СООТВЕТСТВИИ...»

«ЛЮДМИЛА РИМЕР ВЕТЕР ЮГА с КНИГА 1 ЧАСТЬ 2 Москва, 2016 УДК 82-312.9 ББК 84(2Рос=Рус)6-445 Р51 Ример, Л. Г.Р51 Ветер с Юга. Книга 1. Часть вторая / Л. Г. Ример. — М. : Л. Г. Ример, 2016. — 410 с. ISBN 978-5-9908883-0-2 Шестиклассник Никита, чудесным образом оказавшийся в эпохе Средневековья, ст...»

«Способы управления эксплуатируемым обществом m co b. lu Итак, очевидно, что российское, а равно как еще десяток, преимущественно азиатских обществ, являют собой переходные стадии или фактически длящиеся до сего дня состояния C массированной и инте...»

«НАУКОВІ ЗАПИСКИ НДУ ім. М. ГОГОЛЯ УДК 35:378.147 РЕАЛИЗАЦИЯ КОМПЕТЕНТНОСТНО ОРИЕНТИРОВАННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ ОБУЧЕНИЯ ИНОСТРАННОМУ ЯЗЫКУ ГОСУДАРСТВЕННЫХ СЛУЖАЩИХ И ДОЛЖНОСТНЫХ ЛИЦ МЕСТНОГО САМОУПРАВЛЕНИЯ Бранецкая М. С. В статті уз...»

«НОРВЕГИЯ Апартаменты и коттеджи на рыболовных базах в окрестностях Бергена JANDIS AS Tour Operator, org. nr. 993 571 318 Содержание: Рыболовные базы на острове Сутра 1 – СУТРА-1, 6-10 чел 2 – СУТРА-2, 4-6 чел Рыболовные базы на островах Ойгарден 1 – ОЙГАРДЕН-1 – остров Сельой, 2-10 чел 2 – ОЙГАРДЕН-2 – остр...»

«МУК "Межпоселенческая центральная библиотека" г. Унеча "ЭТО НАША С ТОБОЙ БИОГРАФИЯ" Хроника дат и событий 1944-2014 годы Десятилетия Унечский район 40-е годы 1940г. XX века 16 августа Указом Президиума Верховного Совета РСФСР рабочий п...»

«МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (МГС) INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC) ГОСТ МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ 31988СТАНДАРТ Услуги общественного питания МЕТОД РАСЧЕТА ОТХОДОВ И ПОТЕРЬ СЫРЬЯ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ПРОДУКЦИИ ОБЩЕСТВЕННОГО ПИТАНИЯ Издание официальное М о ск...»








 
2017 www.kniga.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - онлайн материалы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.